北纳生物-北京北纳创联生物技术研究院

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绒猴EBV转化的白细胞-北纳生物
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【B95-8】

绒猴EBV转化的白细胞

  • 价格: ¥2000
  • 编号:BNCC338523
  • 形态:
    上皮样细胞,圆形,菱形
  • 交付:一至两周
  • 品牌:BNCC
基本套餐 DNA提取
套餐:
  • 套餐一:说明书+支原体检测报告+复苏细胞x1
  • 套餐二:说明书+支原体检测报告+冻存细胞x2
  • 套餐三:说明书+支原体检测报告+复苏细胞x1+100mL完培
  • 套餐四:说明书+支原体检测报告+冻存细胞x2+100mL完培
  • 套餐五:说明书+支原体检测报告+复苏细胞x1+冻存细胞x1+100mL完培
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绒猴EBV转化的白细胞基本信息
培养基 RPMI-1640完全培养基:90%RPMI-1640+10%FBS
传代方法 复苏步骤:①冻存管从液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中,迅速没入 37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以 1 分钟内全部 溶解为宜;②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有 9ml 完全培养基的离心管内,1000-1200rpm/min 离心 5 分钟,弃去 上清液,用 1-2mL 完全培养基重悬细胞。③然后将细胞悬液加入到含有 5-6mL 完全培养基的 T25 瓶中,放入培养箱培养。 细胞传代:①将旧培养液吸除,PBS 清洗两遍后,加入 1-2mL 胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②镜下观察消化情况, 在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续 消化),直接吸掉胰酶,加入 5-6 毫升完全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。③将细胞悬液按 1:2 比例分到 新的 T25 瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。④注意培养基 pH 值变化和细胞密度,定期换 液(每周 2-3 次),待细胞密度达到 80%-90%时,重复传代操作或者冻存。
生长条件 培养温度37℃;气体环境5%CO2+95%空气;
生长特性 贴壁生长
存储条件 液氮
安全等级 1
形态 上皮样细胞,圆形,菱形
分离基物 外周血淋巴细胞
共享方式 公益性共享

B95-8 绒猴 EBV 转化的白细胞

贴壁,上皮样细胞

编号: 338523

产品形式: 2mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ;

安全等级: 一级,安全柜或超净台操作

培养:37℃,5%CO2 CM2-1 培养液

收货须知:收货当天发现异常,请在 24 小时内及时联系客服,逾期视为收货良好;冻存管形式,收货后及时置于-80℃冰箱保存,若 长时间不使用,应过夜转移至液氮保藏;T25 形式,收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h,然后再对细胞进行常规操作。复苏时每 管一次用完不得留存,复苏后传一代,即可正常使用。请严格按照本说明操作,否则造成细胞失活等情形,不予提供补发服务。

培养条件:37℃,5%CO2,CM2-1 培养液。CM2-1 培养液:90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640:1640 培养液,含谷氨酰胺。

复苏步骤:

①新制 100mm 平皿 1 个,含 12mL 上述培养液;

②冻存管从液氮或-80℃中取出,37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入 安全柜复苏;

③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中,顺时针摇匀;

④放入(37℃,5%CO2)培养箱中,过夜换液,2-4 天长满。

传代/冻存:将旧培养液吸除,PBS 清洗两遍后,加入 6mL(/100mm 皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落 时,则吸除大部分胰酶,留约 0.5mL,移至培养箱消化,约 2min 取出。

①传代:用 12mL CM2-1 培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后 可分 3~6 皿培养;

②冻存:用 6mL 冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为 6 支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存。

复苏质量记录:根据复苏要求,对以上细胞株进行复苏,记录结果如下:

项目 质量标准 复苏记录
复活性 12h 贴壁,70h 长满 80% 过夜 18h 观察贴壁,66h 密度达 80%
细胞形态 贴壁,上皮样细胞 CM2-1 培养液中,贴壁,上皮样细胞,圆形,菱形
附图
结论 复活性好,且细胞形态无异常,合格

质检员/日期: 张鑫 2019.03.13       审核员签字:杨晴

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