北纳生物-北京北纳创联生物技术研究院

  • 质量管理体系认证证书 质量管理体系认证证书
  • 工程技术研究中心 工程技术研究中心
  • 高新技术企业证书 高新技术企业证书

重组酶聚合酶扩增(RPA)技术简介

曹勋-会员头像-www.bncc.com北纳生物
曹勋 2020-06-03 11:20 评论( 0 ) 浏览( 93394 )

核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术——RPA

重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。

RPA原理介绍

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

RPA分析的关键在于扩增引物和探针的设计。PCR引物多半是不适用的,因为RPA引物比一般PCR引物长,通常需要达到30-38个碱基。引物过短会降低重组率,影响扩增速度和检测灵敏度。在设计RPA引物时,变性温度不再是影响扩增引物的关键因素。RPA的引物和探针设计不像传统PCR那样成熟,用户需要自己摸条件进行优化。

RPA技术有哪些优势

常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤,而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的最适温度在37℃-42℃之间,无需变性,在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要温控设备,RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。

据介绍,RPA检测的灵敏度很高,能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平,从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理,适用于无法提取核酸的实地检测。

RPA既可以扩增DNA也可以扩增RNA,还省去了额外的cDNA合成步骤。你不仅可以对扩增产物进行终点检测,还可以对扩增过程进行实时监控,甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。

点赞图片
  • 暂无回复...

登录后才可以评论

立即登录
发表评论
楼主动态
相关推荐
  • 幽门螺杆菌的传代方法 幽门螺杆菌是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功,是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。该菌的培养方法如下:1、培养基:哥伦比亚血平板(CA-B):酪蛋白胰酶消化物10.0g,心胰酶消化物3.0g,玉米淀粉1.0g,肉胃酶消化物5.0g,酵母浸出粉5.0g,氯化钠5.0,琼脂20.0g,蒸馏水1.0L,pH7.3±0....
  • 免疫B细胞的制备 血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死,在无菌操作下取组织,放 在 4°C无血清培养基中,最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得单细胞悬液,不能用毛玻璃磨碎组织取细胞,因为那样可损害细胞膜的完整性。在准备骨髓瘤细胞的同时,脾细胞或淋巴结细胞用无血清培养基洗3 次(4°C ...
  • T淋巴细胞介导的细胞毒性 T淋巴细胞介导的细胞毒性是细胞毒性T淋巴细胞的特性,凡致敏的T淋巴细胞再次遇相应靶细胞抗原, 可表现出对靶细胞的破坏和溶解作用,它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标,特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤的能力,常作为判断预后和观察疗效的指标之一。常用可传代的肿瘤细胞与淋巴细胞混合,观察计数。
  • 嗜热脂肪地芽孢杆菌的鉴定方法 对于嗜热脂肪地芽孢杆菌的鉴定,传统分类中根据形态特征、生理生化特性、生态特性等指标进行鉴定的方法耗时耗力,因此基于分子生物学的鉴定方法不断发展。2005年,DanielR.Zeigler报道了利用recN基因序列相似性分析鉴定地芽孢杆菌属菌种的研究。研究表明,对于属、种及亚种水平的分类,recN基因序列分析的鉴定分辨率接近甚至比16SrDNA序列分析更高,但突变饱和度限制了recN基因序列对更高层...
  • 野兔热杆菌 病原为土拉杆菌,是一种多形态细菌,在患病动物血液内呈球状,在培养基上则有球状、杆状、豆状、精子状和丝状等;革兰氏阴性,无鞭毛和荚膜,不形成芽胞;本菌抵抗力极强,在污染的土壤中可存活6天,在毛皮上可存活52天,在甘油内,15-保存,可存活3年,但20C以上高温可短时间杀死。常见消毒药来苏儿,碳酸溶液经30分钟致死,20升汞溶液经3分钟致死。自然界中的啮齿类是主要带菌者,通过被患病动物的排泄物或产品污...
推荐产品
请告知您的电话号码,我们将立即回电

通话对您免费,请放心接听

温馨提示:

1.手机直接输入,座机前请加区号 如13164239859,010-58103778

2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听

3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听

关闭
大抽奖
请设置您的密码:
分享到微信